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如何簡化葉綠素含量測定步驟

葉綠素含量是反映植物特別是光合機構生理狀況的一個基本指標,植物生理研究中經常涉及葉綠素含量的測定。一般的測定方法都包括葉片稱重、研磨、沖洗、過濾和定容(25 mL或更多)及稀釋等繁瑣步驟,既費時間,又費溶劑,不適于科學研究中大批量樣品的測定,特別是以葉片鮮重表示的葉綠素含量,不僅容易受葉片含水量變化的干擾,給測定結果帶來偏差,而且也不便于同以單位葉面積表示的光合速率聯系起來分析兩者的關系。目前已經有很多新的方法出現，如葉綠素儀測定法，和本文要講到的葉絲浸提法。其中葉綠素儀法比較簡單，直接將便攜式葉綠素儀帶到田間，夾在葉片正反面，然后按下測試鍵，就可也得到SPAD值，SPAD值代表的是葉片的葉綠素含量值。另外SPAD和氮元素含量也有一定的關系，可以指導施肥。正因為測出的值是SPAD值，葉綠素儀又可以叫做SPAD502葉綠素儀。

葉絲浸提法包括取樣、浸提、比色和計算。以前一般采用的研磨過濾方法提取葉綠素,不僅費時間,從稱重到定容結束,1個樣品至少需要10min,而且由于不可避免的損失,所得到的結果一般會低一些;而用本文中的葉絲浸提法,不算浸提的等待時間,從取樣、切細到投入80%丙酮浸提的操作時間一般不超過1~2min,而且可以避免過濾造成的損失。從用兩種方法測定的結果可以看到,用葉絲浸提法得到的葉綠素提取液可以直接用于比色測定光密度,不需要過濾或離心。雖然在用葉片細絲的浸提液中含有少量浸出物的雜質,但由于其對比色波長的光沒有明顯的吸收,所以測定的結果受到的影響并不明顯。另外，葉片水分含量的不同，也會造成葉綠素含量的不同，一般，含水量高的葉片，其葉綠素含量明顯降低，這個我們在具體操作時是需要注意的。