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(一)生物醫學新技藝與儀表進境及在毒理學踐行的前瞻

來源: http://www.pc256.com  類別:實用技術  更新時間:2012-08-15  閱讀
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隨著各種生物醫學新技術和新方法的建立和改良,各種具有自動化、智能化、信息化、一體化特點的儀器設備在今天科研工作中已成為不可缺少的工具。如全自動血液分析儀、全自動生化分析儀、全自動病理工作系統、全自動酶標儀、流式細胞儀、液體閃爍儀、多媒體顯微成像系統、毛細管電泳儀等等。這些自動化設備的應用改變了以往毒理學研究和檢驗的工作方式,極大地提高了檢測的精確度、準確度和工作效率,使很多以前難以開展的研究和檢驗工作迎刃而解,同時也拓寬了毒理學研究發展的領域。如何把更多的現代高新科技儀器應用到毒理學研究和產品的安全性評價中,對毒理學科今后的發展是至關重要的。

當代生物醫學新技術和新儀器的應用與毒理學發展21世紀的毒理學研究離不開新技術與新儀器的應用,目前在生物醫學新技術中使用的新儀器很多,熟悉其功能及進展情況,可使我們在研究與檢測中更好地應用,以促進學科的發展。通用儀器的技術進步與應用毒理學研究或試驗中應用的主要儀器有: (1)傳感器、微電腦和精密儀器制造等技術催生了電子天平的發明,它的出現對整個科技研究領域和人民生活的便利化可以說是革命性的進步。其準確快捷便利的性能可大大地提高工作效率,增加了實驗數據的科學性、準確性。在配備和使用電子天平時,應注意其精度等級和最大稱量值。目前新一代的天平已有多重應用功能,適應各種不同的要求,如精密稱量精確度達到0 1 000 1 /0 1 000 01;動物測量功能,稱活動的動物時可設定1~50 s自動計算平均重量;比重測量程式,除皮重程式,數據儲存與統計功能,數據分項與匯集輸出接駁電腦功能,使實驗數據的采集分析達到準確高效。

移液器的發明,同樣是極大地提高了實驗工作效率,目前在實驗使用的各種移液器的類型包括單通道、8通道、12通道的手動設定或電子設定式移液器等等,移液范圍有0 1 2~5 000μL系列、0 1~200 mL系列,配液器移液范圍有0 1 2~60 mL系列,滴定儀移液范圍有0 1 01~99 1 99 mL系列。最新的專業化自動移液工作站在核酸抽提、PCR反應設定和擴增及測序等過程可實現全自動化操作。各種先進的離心機,如分析離心機,具備光學系統,用于鑒定、分析或制備樣品;制備離心機,可分離、純化或制備樣品,可用于病毒及亞細胞組分分離,蛋白梯度分離, RNA梯度沉淀,質粒DNA提純等,使各種實驗材料的抽提分離達到新的水平。低速離心機的轉速為8 000~10 000 r/m in,低溫高速型18 000~2 000 r/min、低溫超速型40 000~100 000 r/m in。不同的離心要求配備不同的轉頭,常用的有角度頭、甩平頭、垂直頭和專用轉頭如酶標板頭等。

超純水儀:使用超純水儀可以制備電阻率18 1 2 MΩ、總有機碳1~10μg/L的接近絕對的純水,用于細胞和分子生物學研究,高精密度儀器用水等方面。通用儀器的精密度、準確性和便利性已有很大提高,應用于毒理學研究和檢測可極大提高工作效率。臨床指標檢測的自動化技術毒理學研究或試驗中主要應用的儀器主要有: (1)全自動生化分析儀,用于常規血清生化指標分析、特種蛋白和藥物分析等。最新型號的儀器分析速度可達到恒速每小時800~8 000測試。其優越性能是樣品及試劑的用量少,分析準確快速,計算機數據儲存和處理系統功能強大。血液細胞分析儀,有三分類、五分類全自動血細胞計數儀,血液成分分析工作站。分析技術有電阻抗技術、光電比色技術、如熒光偏振技術、熒光染色技術、免疫化學技術、激光掃描技術等多方位聯合技術。特別是帶有52種動物血液分析軟件包的儀器,十分適合毒理檢測的需要。全自動酶標儀,連續波長一體化的全自動酶標儀實質上就是一臺功能強大的光電比色計或分光光度計。由于其具有迅速、靈敏、成本低、樣本量少及高通量等特點,目前作為免疫學檢驗儀器已在臨床檢驗和科研上廣泛應用,除了進行EL ISA實驗外,可取代傳統的分光光度計進行多種指標的檢測。它的出現是臨床實驗室自動化程度繼生化分析儀、血細胞計數儀之后的又一次更新和提高。

病理實驗制片技術,正向微機自動控制發展,一整套病理實驗系統的配備包括自動排風取材工作柜、自動控制切片機、快速冷凍切片機、電腦程控封閉式脫水機和染色機、組織包埋工作站、自動封片機、計算機輔助病理圖像分析軟件,使病理制片和分析的工作環境改善,工作強度大為減輕,工作效率大大提高。細胞生物學實驗新儀器技術毒理學研究或試驗中主要應用的儀器主要有: (1)生物顯微鏡自發明至今已經有三百多年歷史,發展到現在已有多功能生物顯微鏡、倒置顯微鏡、熒光顯微鏡、立體顯微鏡、顯微操作顯微鏡等多種類型。顯微技術的進步不僅使顯微鏡的清晰度和分辨率達到完美,而且向多媒體顯微成像分析技術迅速發展,可以分析細胞數目、形態特征、細胞功能。用于細胞遺傳學分析的顯微圖像分析系統,還配備了自動掃描式圖像采集分析功能,可進行染色體核型分析、熒光原位雜交( FISH)、比較基因雜交(CGH)和彗星分析等。最新的微光纖式活細胞激光共聚焦成像系統可實時觀察活細胞的活動過程,為研究細胞的多方面結構與功能,提供了很好的手段。

電子顯微鏡的出現,使人類可以幾萬到幾十萬倍放大觀察組織、細胞和細胞器。原子力顯微鏡( atomic force m i 2 croscope,AFM)是顯微成像技術中發展最迅速的技術之一,能夠在生理條件下成像,在分子水平上可實時動態地研究結構和功能關系的動力學過程,這在細胞生物學研究方面有重要的意義。流式細胞儀( flow cytometer, FCM) ,新一代的FCM具有雙激光激發、能同時定量測定6個以上生物學參數,且可同步檢測單個活細胞在細胞水平和分子水平變化的強大功能,而這種功能是當今其他儀器或實驗手段都無法比擬的。用FCM分析各種混懸在液體的細胞或粒子的表型特征或細胞成分,大大拓寬了細胞生物學研究的領域。

FCM在研究外源化合物的細胞毒性和致癌分子機理方面顯現出重要價值,并在毒理學多個分支如:免疫、遺傳與發育、環境內分泌、神經毒理學等研究領域已得到廣泛應用。酶聯免疫斑點圖像分析技術( EL ISPOT) ,該技術的基本原理類似EL ISA,即記憶性T淋巴細胞在再次遇到特異性抗原時可活化分泌細胞因子,被包被在培養板上特異性細胞因子抗體捕獲后,再加入酶標或熒光標記的二抗,顯色或激發后可形成帶有顏色或熒光的產物―斑點,每個斑點是激活的淋巴細胞分泌的細胞因子區,代表一個激活的淋巴細胞。因此可在單個細胞解析度水平測量抗原特異性T細胞對特征抗原的反應能力及計數其刺激下分泌性淋巴細胞產生的情況。

近年來, EL ISPOT技術的應用越來越廣泛,已成為免疫學的重要實驗方法,特別是在靶向疫苗的研究和質控、化合物和藥物免疫學反應的篩選中應用較多。分子生物學新技術新儀器一些常用的分子生物學技術,如基因重組和克隆技術、電泳技術、核酸雜交技術、PCR技術、DNA測序技術以及一系列突變檢測技術已廣泛應用于外來化學物和環境致癌物引起的DNA損害、基因突變、加合物形成、基因多態、癌基因和抑癌基因的檢測,數量逐年增加。近年來,一些新的分子生物學技術的引進與建立,又進一步提高了毒理學研究的整體水平。主要有: (1)高效核酸純化系統:基于固相陰離子交換技術和磁珠技術的原理使核酸制備工作更簡便、安全和高效,可應用于大批量的毒理學樣品檢測。http://www.pc256.com

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